双缩脲试剂(DTT)是一种常用的还原剂,常用于生物化学和分子生物学实验中。它可以还原蛋白质和其他生物分子中的二硫键,从而使其变为单硫键,用于解离和处理蛋白质复合物。
以下是双缩脲试剂的一般使用方法:
制备溶液:将双缩脲粉末溶解在适当的缓冲液中,如Tris-HCl缓冲液。通常使用浓度为0.1-1M的双缩脲溶液,具体浓度可根据实验需求进行调整。
加进试样:将需要还原的蛋白质溶液或其他生物样品加进含有双缩脲的溶液中,并充分混合。确保试样与双缩脲溶液充分接触,以促进还原反应。
反应条件:根据实验要求,可以调整反应的时间和温度。通常在室温下进行反应,持续10-60分钟。较高的温度和较长的反应时间可能会有更彻底的还原效果。
反应停止:反应完成后,可以通过添加还原剂的对应体积的稀酸(如HCl)或直接加进硫氰酸钾(KCN)来停止还原反应。这可以避免反应继续进行并保护还原后的样品。
需要留意的是,双缩脲试剂在空气中相对不稳定,轻易氧化失效,所以在使用前应储存于无湿气的密封收留器中,并在使用时避免暴露在空气中。同时,在实验操纵过程中,要留意安全操纵,并遵循实验室的相关规章制度。
以上是双缩脲试剂的一般使用方法,具体的使用步骤和条件会因实验目的和需求而有所差异。在进行实验操纵之前,建议参考相关的文献和实验方案,确保正确使用双缩脲试剂以达到预期的实验效果。
双缩脲试剂由0.1g/ml氢氧化钠和0.01g/ml硫酸铜组成。在碱性条件下鉴定蛋白质。使用时先加进A氢氧化钠NOH2溶液后加进B硫酸铜溶液。CuSO4不要过多加进,不然它的蓝色会覆盖红紫色
双缩脲试剂A是质量分数为0.1g/mL的NaOH水溶液;
双缩脲试剂B是质量分数为0.01g/mL的CuSO4水溶液.
先在待测液中加进双缩脲试剂A3mL,振荡均匀(营造碱性环境),再加进1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。假如待测液里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
双缩脲试剂由0.1g/ml氢氧化钠和0.01g/ml硫酸铜组成。
在碱性条件下鉴定蛋白质。使用时先加进A氢氧化钠NOH2溶液后加进B硫酸铜溶液。CuSO4不要过多加进,不然它的蓝色会覆盖红紫色
双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,天生红紫色的络合物.所有的蛋白质均有此显色反应.双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂.它是NaOH和CuSO4两种溶液.在实验过程中,先在含蛋白质的溶液中加进等体积的NaOH溶液,混合均匀后,再滴几滴CuSO4溶液(量较少).即先后加进NaOH和CuSO4溶液.假如在NaOH中滴几滴CuSO4溶液混合后,再加进到含蛋白质的溶液中,混合液中就没有Cu2+,显色反应就不会发生.除-CONH-有此反应外,-CONH2-,-CH2-,NH2-,-CS-CS-NH2,等基团亦有此反应。
要
双缩脲试剂是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成(双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液,双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液),双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。
具体方法是:
先将双缩脲试剂A加进组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加进双缩脲试剂B,振荡均匀。假如组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质,海运报价 国际快递,与蛋白质接触后的颜色呈紫色。
在使用双缩脲试剂时候,必须留意,必须是先加0.1g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加进硫酸铜[CuSO4]溶液,再加进氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,跨境铁路 国际物流,天生蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的.)
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